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          使用凱氏定氮法測定蜂王漿粗蛋白

           發布時間:2022-04-07 點擊量:171

          使用凱氏定氮法測定蜂王漿粗蛋白

          1.原理     
            以濃硫酸消化分解蛋白質,其中的氮變成氨,再與硫酸化合生成硫酸銨。生成的硫酸銨與氫氧化鈉反應再生成氨,用蒸餾法使氨蒸出,用標準濃度的硫酸溶液與其反應,剩余的硫酸再經氫氧化鈉標準溶液滴定,從實際消耗的酸量可推算出生成的氨量。 
          2.儀器與試劑 
          (1)儀器:分析天平(0.000 lg)、50ml凱氏燒瓶、凱氏定氮半微量蒸餾裝置1套、滴定裝置1套。 
          (2)試劑: 濃硫酸(分析純,密度1.84)。 
          硫酸銅與硫酸鉀混合試劑:稱取5水硫酸銅1g、硫酸鉀10g,置于研缽中混合均勻,研細備用。 
          混合指示劑:量取0.1%次甲基紅乙醇溶液2份和0.1%溴甲酚綠乙醇溶液3份,臨用時混合。 
          2%硼酸溶液:稱取硼酸2g,量取混合指示劑2ml、乙醇20ml,置于錐形瓶中,加蒸餾水溶解并稀釋至100ml,搖勻備用。 
          40%氫氧化鈉溶液:稱取氫氧化鈉40g,加蒸餾水溶解并稀釋至100ml。

          稀硫酸:量取濃硫酸5.7ml,加蒸餾水稀釋至100ml。 
          0.01 mol/L的標準酸溶液
          3.測定方法 
          (1)消化:準確稱取蜂王漿樣品約1g,放入干燥的凱氏燒瓶內,加入2g硫酸銅與硫酸鉀混合試劑,再沿瓶壁緩緩加入61ml濃硫酸,在瓶口放一小漏斗,使燒瓶成45°斜放,在通風櫥內置于電爐上加熱消化(先小火緩緩加熱,使溶液溫度保持在沸點以下,等暴沸停止后,逐步加大火力)。待消化液呈清澈的亮綠色后,再繼續加熱30min,消化即可完畢(消化時間約為lh),冷卻后備用。 
          (2)蒸餾:量取2%硼酸溶液10ml置于100ml的錐形瓶中,加入混合指示劑2滴和少量稀硫酸,將冷凝管頂端浸入液面下。然后,將凱氏燒瓶中的消化液經由漏斗移人蒸餾器中,用少量蒸餾水淋洗凱氏燒瓶和玻璃漏斗數次。向蒸餾器中加入40%氫氧化鈉溶液約25ml之后,再加入5ml蒸餾水(一半流入蒸餾器,一半在玻璃杯中作水封)。用調溫電爐加熱開始蒸餾。待錐形瓶內溶液的顏色由酒紅色變為藍綠色時,繼續蒸餾10min,將冷凝管頂端提出液面,使蒸汽繼續沖洗1 min,用少量蒸餾水淋頂端,停止蒸餾。 
          (3)滴定:用0.01 mol/L的標準酸溶液滴定錐形瓶中吸收的氨量,滴定至溶液由藍綠色變為灰紫紅色為終點,并作空白試驗校正。 
          4.計算       

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          式中:

                V1——樣品消耗標準酸溶液的體積,mL;

                V2——空白消耗標準酸溶液的體積,mL;

                N——標準酸溶液標定的當量濃度,mol/L;

                0.014——1N標準酸溶液1mL相當于氮克數;

                F——蛋白質系數,蛋白制品為6.25;

                m——樣品的質量,g;

                D——樣品的稀釋倍數。

          平行實驗允許誤差不超過±2%,取平均值確定結果。
          鑒于手工操作比較繁瑣,推薦使用北京優譜通用科技有限公司的1800系列全自動凱氏定氮儀進行測定,全自動操作,
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